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常用的厌氧培养方法有哪些

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1.厌氧缸法接种标本平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸培养。厌氧缸是一种普通的干燥缸,通过物理和化学方法使气缸产生厌氧环境,从而培养厌氧菌。

2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋中引起厌氧环境培养厌氧菌。塑料袋透明不透气,内部气体发生管(含P氢化钠碳酸氢钠固体和5%柠檬酸安瓿)、美兰指示管、钯催化剂管、干燥剂。放入接种平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,再折断美兰指示管,命名袋内半小时内造成无气环境。如果不突变,说明袋子已经达到厌氧状态,可以孵化。

3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)厌氧培养箱是迄今为止公认的培养厌氧菌的好仪器之一。它是一个封闭的大型金属箱,盒子前面有一个透明的有机玻璃面板,板上有两个手套,可以通过手套在盒子里操作,故名。箱侧有一个交换室,内外有两扇门,内门通箱先关。想把东西放进盒子里,先打开外门,放进交换室,关上外门抽气换气(H2,CO2,N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套打开交换室内门,将物品移入箱内,关闭内门。箱内保持厌氧,也是利用钯催化下充气中的氢和箱内钱残余氧化合成水的原理。该箱可以调节温度,即孵化器或孵化器附着在其中,也可以放入解剖显微镜观察厌氧菌落。该厌氧箱适用于大量厌氧细菌的培养和研究,大量培养基可放入预还原和厌氧无菌试验中。自动调节金属硬壁厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度。

4.厌氧盒:原理与厌氧袋相同,有成品销售。

5.生物耗氧法:将生物(多为植物)放入封闭容器中,消耗氧气,产生二氧化碳供细菌生长。我没见过。

6.焦性末食子酸法:将纱布或滤纸铺在干净的玻片上,均匀撒上焦性末食子酸,然后混合NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速将接种细菌的平板倒扣在上面,用融化的蜡密封边缘,形成一个封闭的空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该方法用于培养厌氧不严格的厌氧菌,简单。如果有梭状芽孢杆菌。

7.疱肉培养基:是一种无需特殊设备的厌氧培养方法。疱肉和肉汤放入大试管中,液面密封凡士林,造成无氧环境。

厌氧环境形成:根据使用要求放置必要的配件和器具,并将两个无毒塑料袋放入操作室。打开电源照明灯,打开温度控制器,调需的温度和安全温度。将100000个操作室放入操作室g钯颗粒(封闭)和500g将干燥剂放入美兰指示剂(封闭)中。关闭室内外取样门,抽真空验证。第一次更换操作室(氮气更换):用橡胶管插入操作室进气口,另一端插入塑料袋。打开氮气进气路,打开氮气控制阀,使两个塑料袋充满氮气,然后拧紧袋口。将乳胶手套绑在观察板法兰圈上。将塑料袋中的氮气逐渐放入操作室,直到全部释放。重复操作室第二次置换(氮气置换) 二次充氮过程,注意随时用脚踏开关开关排气。操作室第三次置换(混合气体置换):(混合气体比例如下:N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%)调换气路,打开混合气道通阀进气。充气时,脚踏开关应随时混合气装满塑料袋后,关闭混合气直通阀(三通阀),通过流量计输入混合气,调整流量计,流量约为每分钟10ml。将塑料袋中的混合物逐渐排入操作室。三次通风后,室内气体含氧量处于极微量状态。操作室打开钯颗粒除氧剂,连接除氧催化器电源进行催化除氧,一 小时后,打开美兰指示器(美兰安瓶)观察其变色情况,不变色为操作室内厌氧环境。打开紫外线灭菌灯,室内灭菌。自定灭菌时间。

厌氧培养箱注意事项:尽量安装在空气安静、温度变化小的地方。启动前,应充分熟悉和了解配套仪器仪表的说明书,掌握正确的使用方法。在操作室达到绝对厌氧环境后,必须放入培养物。如有故障(停气等原因),操作室仍可保持厌氧12小时。(如果超过12小时,根据需要取出培养物进行单独处理)。经常注意气路是否漏气。换气瓶时,注意拧紧气管,避免流入含氧气体。按要求使用真空泵,定期检查加油情况。停止使用,关闭总电源键和设备后部的电源开关。


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